光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)基本上由三部分組成：光源（氘燈、鎢燈）、單色儀（光柵、狹縫）和檢測器（光電二極管、光電倍增管）。在我們使用的波長范圍內(nèi)（通常紫外-可見光儀器在190nm～1100nm的范圍內(nèi)），在不同波長（光源的發(fā)射強(qiáng)度、單色儀的色散強(qiáng)度和檢測器的放大率），上述組件的響應(yīng)值是不同的；一般來說，即使沒有樣品，如果儀器不進(jìn)行基線校準(zhǔn)，吸光度或透射率在190nm至1100nm范圍內(nèi)也不會是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。分光光度計(jì)的基線校準(zhǔn)分為系統(tǒng)基線校準(zhǔn)和用戶基線校準(zhǔn)，下面我們就一起來看看具體的校準(zhǔn)方法。

系統(tǒng)基線校準(zhǔn)

系統(tǒng)基線的校準(zhǔn)相對簡單。通常，樣品不在樣品室中放樣，僅校準(zhǔn)光學(xué)系統(tǒng)；如果有必要使用全波段測量，那是另一回事。同時，應(yīng)注意，系統(tǒng)基線不需要頻繁校準(zhǔn)。通常，它可以半個月或一個月校準(zhǔn)一次。對于某些儀器，系統(tǒng)基線校準(zhǔn)過于頻繁，這將導(dǎo)致嚴(yán)重的基線漂移。

用戶基線校準(zhǔn)

正確的校準(zhǔn)方法是將兩個裝有空白溶液的反應(yīng)杯分別放置在樣品和參考光路中，校準(zhǔn)波長范圍大于分析波長范圍；例如，如果分析設(shè)置范圍為220nm～500nm，則校準(zhǔn)波長應(yīng)設(shè)置為210nm～510nm；等待校準(zhǔn)完成，然后將波長設(shè)置回220nm～500nm的原始范圍。這種校準(zhǔn)方法的優(yōu)點(diǎn)是：如果校準(zhǔn)波長與分析波長一致，則在校準(zhǔn)基線的兩端可能存在較大的噪聲；如果校準(zhǔn)范圍大于實(shí)際分析范圍并且消除末端，則可以提高分析精度。

值得注意的是，一些儀器操作員在執(zhí)行基線校準(zhǔn)時，沒有將參考溶液放在參考側(cè)，即他們使用空氣進(jìn)行參考控制。這種方法可能對可見光區(qū)域的一些樣品影響很小，但在紫外區(qū)域效果會很明顯。嚴(yán)格來說，以空氣為參考測量的結(jié)果不是真實(shí)的校準(zhǔn)光譜。

基線校準(zhǔn)注意事項(xiàng)

（1）在基線校準(zhǔn)期間，確保儀器有一定的預(yù)熱時間。

（2）每次更換參考溶液后，應(yīng)再次進(jìn)行基線校準(zhǔn)。

（3）如果參考溶液的吸光度大于樣品的吸光度值，則測試結(jié)果為陰性。此時，有必要考慮使用哪種解決方案進(jìn)行基線校準(zhǔn)。

（4）在進(jìn)行基線校準(zhǔn)時，應(yīng)考慮試劑的波長范圍，因?yàn)槟承┰噭┰谔囟úㄩL下的吸光度值將是無限的。此時，校準(zhǔn)將超出儀器的有效范圍，無法獲得真實(shí)結(jié)果。目前，試劑的波長范圍一般標(biāo)注在試劑瓶的標(biāo)簽上。